의학 및 약리 과학에 대한 유럽의 검토

oligoasthenoteratospermia에서 이노시톨 활성 -시험 

M. COLONE1, G. MARELLI*, V. UNFER**

G. BOZZUTO1,
A. MOLINARI1, A. STRINGARO1

1 기술 보건부, 국립 보건원, 로마 (이탈리아)
* 산부인과 학 클리닉, 과학 연구소 입학 및 치료, 세인트 라파엘
병원, 밀라노 (이탈리아)
** 페루자 대학 (이탈리아)의 산부인과 클리닉

추상.-배경 : Oligoasthenoteratospermia,
모티프 감소 및 정자 및 형태 변화,
불임의 가장 중요한 원인 중 하나이다.
남자. 영향을 줄 수있는 요인 중 하나
남성 불임은 반응성의 생산과 관련이있다.
형태 학적으로 변형 된 산소 종 (ROS)
정자. 정자가 더 민감하다.
다른 세포 종보다 해로운
이러한 화합물의 활성. 특히
ROS는 운동성, 형태 및 DNA에 영향을 미칠 수 있습니다.
정자의 안정성.
목표 : 현재의 in vitro 연구에서
천연 물질 인 이노시톨이 조사되었습니다.
가능한 항산화 제로서
남성 불임의 전신 치료
정자의 체외 품질 향상
수정을 위해 의학적으로 도움을 받았다.
생식 과정.
재료 및 방법 : 수집 된 샘플,
고통받는 과목에 속한다.
과증식 및 퇴행성 과민증
위상차 현미경 검사
정자를 평가하기 위해
운동성, 이노시톨 2 mg / ml로 처리 한 후
Scanning 전자 현미경에 제출
(SEM) 및 투과 전자 현미경
(TEM). 표면 및 표면을 모두 조사 할 수있는 SEM
생물학적 시료의 형태와
치료에 의해 유발 된 변화
이노시톨. TEM은 미세 구조의 세부 사항을 연구 할 수있었습니다.
생물학적 샘플의
결과 : 고통받는 환자의 표본
oligoasthenoteratospermia에서 spermatozoa
무정형으로 완전히 덮인 것처럼 보입니다.
과도한 점성을 부여하는 섬유상 물질
정액에 전달하고, 감소 시키거나 피한다
세포 이동성. 이들 샘플의 현미경 사진
그 중간체에있는 미토콘드리아가
통로가 현저히 손상된 것으로 보인다.
cristae. 이노시톨 처리 후
병리학 적 샘플은 부재
아마도 비정질 재료 때문에
정액 pH의 변화. 또한, 그들은
대조군 표본 미토콘드리아와 더 유사한 형태 학적으로 미토콘드리아의 존재를 보여 주며,
미토콘드리아에 관련된 손상이 적다.
cristae.
결론 :이 예비 자료가 나타난다.
이노시톨은 항산화 제 때문에
미토콘드리아를 우선적으로 겨냥 할 수있다.
더 많은 연구가 요구된다.
조합을 더 잘 정의하려는 목적
샘플의 ROS 값 사이, inositol in
시험 관내 치료 및 올리고 퇴행 진통증.

핵심 단어 :
Oligoastastoteratospermia, 반응성 산소
종, Scansion 전자 현미경, 전송
전자 현미경.

소개

정자 수 및 운동성 감소
그들의 형태학의 변화와 함께
"oligoasthenoteratospermia"라고합니다. 30-35 %
병인과 함께 제시하는 불임 부부의
알 수 없습니다. 몇몇은 제안 된 치료법입니다.
그러한 질병을 치료하기위한 것. 하나,
그들은 종종 효과가 없습니다. 지난 몇 년 동안
몇 년 동안 과학 공동체는
산화 스트레스 연구에 대한 연구,
그 이유 중 하나는,
남성 불임에 영향을 줄 수있는
활성 산소 종 (reactive oxygen species, ROS)
형태 학적으로 변형 된 정자 -

8. 사실, 어떤 관점에서 볼 때 특정
정자 생성 된 유리기의 양
의 과정에서 중요한 것으로 보인다.
그들의 성숙과 그들의 생식 기능 9)
다른 지점에서 받아 들여야한다.
정자가 세포라는 사실을 고려해야한다.
다른 세포 종을 특징 짓는 방어 메커니즘이 없음 4,10. 결과적으로, 정자
부정적인 영향을 훨씬 받기 쉽다.
산화 반응에 의해 생성 된 효과.
초과 급진파의 대부분은
정액에 의한 백혈구 또는 미성숙 한 사람에 의한 백혈구
정자에서 조기에 방출 된 정자
tubules. 그런 급진파는
남성 배우자의 스트레스. 어떤 경우에는
그러한 배우자의 형태 학적 특징 (즉,
머리와 꼬리 구조) 결과가 변경되었지만, 위
모두, 그들은 부정적인 방식으로 영향을 미친다.
정자의 발현과 안정성
핵심, 즉 유전 암호.

따라서 수컷에 영향을 미치는 산화 스트레스
배우자 (gametes)는
세포 운동성 및 형태뿐만 아니라 DNA
안정성 및 정상적인 미토콘드리아 구조. 미토콘드리아
에너지를 생산하는 세포 기관이다.
(ATP)는 정자의 성능을 위해 필요합니다.
그들의 기능의. ROS는 실제로 유도 할 수 있습니다.
미토콘드리아 막의 변화
따라서 정자 기능을 손상시킬 수 있습니다 12.
손상된 이후로 악순환을 일으킨다.
차례로, 막의 추가 생산을 유도한다
ROS13의 결과는 다음과 같습니다. reduced
인간의 비옥 한 능력, 조기 유산
어떤 경우에는 유전 적 변화
배아 관련.
몇몇은 유도 할 수있는 상황이다.
정액에서 산화 스트레스 : 병적 상태
생식 기관 관련
(정맥류, 전립선 염) 14-16, 특정 생활 양식
(흡연, 알코올 중독, 마약 중독) 17-20, 환경
오염 (방사선, 스모그, 산업
가스) 21-23 및 영양 오류 (불균형 고지 질
다이어트) 24.
체세포의 대다수는 내인성
산화 방지제; 그들 중 일부는
(superoxide desmutase)와 같은 효소 유형의,
카탈라아제 및 글루타티온 / 퍼 옥시 다제 - 글루타티온 /
다른 효소 타입이 아닌 반면,
비타민 C, 비타민 E, 코엔자임 Q10 등
그러나 그러한 방어 시스템이 부적절 할 때,
ROS는 과도하게 생성되어
세포막 산화에 의한 병리 적 손상
지질 및 단백질뿐만 아니라 DNA 구조,
따라서 세포 기능을 변화시킨다.
현재의 in vitro 연구에서 자연의 역할
물질, 이노시톨은
전신에 대한 가능한 항산화 제
남성 불임 치료 및 개선
체외에서 사용 된 정자의 품질
수정은 생식 보조 생식에 적용된다.

절차 25,26.

이노시톨은 순환 설탕과 비타민 요소입니다.
비타민 B2 복합체에 속한다; 그것은 관련되어있다.
칼슘 의존 세포 내 신호 전달
경로 및 세포 신호 전달
혈장 막을 통해 27. 이노시톨
세포를 포함한 여러 세포 과정을 조절한다
칼슘을 통한 분화와 증식
release28. 자극 유발 효과를 유발할 수 있습니다.
모터 수준 및 중추 신경계 (CNS)
수평. 그것은에 참여하는 유기 화합물입니다
막 인지질의 조성. 이노시톨
근이영양증 치료에 사용 29
간 질환 30. 또한,
특정 내분비선의 분비
gonads31. 그것의 자연적인 근원은 처리되지 않는다
감귤류, 맥주 효모.
최근 연구 32)는 이노시톨 침투를 제안했다
정자의 성숙과
부고환에서의 이주.



재료 및 방법

정보에 입각 한 동의서를받은 후, 샘플
정액에서
과증식이있는 피험자에게서.
수집 된 샘플이 제출되었습니다.
위상차 현미경으로
정자 운동성을 평가하십시오. 표본
그들의 평가를 위해 트리 판 블루로 염색되었다.
활력을 가한 다음 이노시톨 2로 치료했습니다.
㎎ / ㎖의 농도로 30 분, 1 시간 또는 2 시간 동안
제어 된 CO2 대기 하에서 37 ° C. 수행원
위에서 언급 한 절차,
샘플을 전자 현미경으로 투시 하였다
(SEM) 및 투과 전자 현미경
(TEM).
이 연구는 현지 윤리위원회의
승인을 받았습니다.
샘플 수집을 시작하기 전에위원회.

Scansion 전자 현미경

SEM은 표면 형태학
적절하게 준비된 생물학적 시료
그리고 그들에 의해 유도 된 장래의 변화는
여러 종류의 요원과 치료, 개발
병리학 적 상황의
환경 조건의 변화. 샘플
다음과 같이 준비했다.
절차 : 정자는 유리 슬라 이드에 붙어 있었고,
직경 13 mm, 다음으로 덮음
2.5 % glutaraldheyde에 의해 고정 된 폴리 라이신
용액을 0.2 M 카코 딜 레이트 완충액 (pH 7.3)에 용해시키고, 실온에서 60 분 동안 유지시켰다.
동일한 완충액에서 몇 차례 세척 한 후,
사후 고정은
0.2 M cacodylate에서 1 % 오스뮴 4 산화물 (OsO4)
pH 7.2의 완충액에 실온에서 60 분간 처리 하였다.
그 후 시료를
에탄올의 스칼라 용액을 증가시키는 수단,
CPD의 면전에서 뽑아 내고 덮었다.
스퍼터링을 사용하여 30nm의 금 층으로
기술. 마지막으로 샘플을 검사했다.
전자 현미경을 통해
Cambridge Stereoscan 360.


투과 전자 현미경

TEM을 사용하면
생물 학적 샘플. 샘플 준비
TEM 시험은
매우 얇은 시험편은 교차되어야한다.
소스에 의해 발생 된 전자에 의해
다음은 절차의 주요 단계입니다.
고정 및 사후 고정, 탈수, 침투
수지, 시료의 중합
구분 및 대비. 즉,
샘플을 2.5 % (v / v) 글루 탈 알데히드
0.1 M (pH 7.4) 카코 딜 레이트 용액
4 ℃ 온도에서 밤새 처리한다. 그런 다음
샘플을 2 % Agar Noble in
스칼라 용액을 증가시켜 탈수 된 물
에폭시 수지 (에포 (Epon) 812, Agar Scientific Ltd, Stansted, U.K.)에 끼워 넣었다.
극박 시험편 단면은
ultramicrotome Nova (LKB, Bromma, Sweden).
시험을 수행하기에 앞서,
배양을 통해 대조를 이뤘다.
우라 닐 아세테이트 및 리드 시트 레이트. 표본
전송 전자로 최종 검사를 받았다.
현미경 Philips 208 (FEI Company, Eindhowen,
네덜란드).

결과

SEM에 의한 많은 관측이 수행되었다
정액에 속하는 시료의
정상적인 정자 기증자와 고통받는 기증자
oligoasthenoteratospermia에서 (그림 1). 그만큼 정자 세포 표면의 정성 분석 대조군에서,
정상 형태의 정자 (그림
1a), 반면에 고통받는 환자의 표본
oligoasthenoteratospermia에서 spermatozoa
비정질 섬유질로 완전히 덮인 것처럼 보입니다.
자료. 이러한 피복층은 정액의 과도한 점성에 책임이있다.
결과적으로 감소되거나 결핍 된 유체
위상차 현미경에서 관찰 된 세포 이동성.
도 1c 및 1d는 마이크로 그래프
이노시톨 (2 mg / ml)을 2 시간 동안 처리 한 후 동일한 시험편과 관련이있다.

37 ° C. 대조군의 정자 세포 (도
도 1c)는 정상의 변형되지 않은 표면 형태를 나타낸다
중간체의 약간의 농화와 관련
tract (화살촉). 잘 지내다.
알려진, mitocondrial 칼집이 들어 있습니다. 그만큼
이노시톨 처리 된 병리학 표본 (그림
도 1d)는 비정질
미처리 시료에 존재하는 물질
(그림 1b). 또한,
정자 중간 경로의 두께는
그러한 표본 (화살촉)에서도 눈에.니다.
발견 된 데이터는 이노시톨
치료가 처음에는 녹을 수있다.
비결 정성 섬유질 물질을 유도,
아마도 정액의 pH 변화 일 것입니다.
이러한 가설은
동일한 검체에서 얻은 결과
TEM. 초박막 섹션에 대한 관찰
대조 표본의 정자가 정자를 나타낸다.
많은 온전한 미토콘드리아 주변
Spermatic flagellum의 축색 돌기 (그림
2a). 반대로, 정액의 현미경 사진
피험자에 속하는 표본
oligoasthenoteratospermia에서 (그림 2b)
(Aa)가있는 손상된 정자를 보여줍니다.
소외 된 염색질 (Cm). 또한, 미토콘드리아,
중간에 현저하게 손상된 cristae (그림
2b, 화살표 머리). 2 시간의 이노시톨 후
37 ℃에서 2 mg / ml 처리하고, 병리학 적으로
미토콘드리아의 존재를 보여주는 표본
형태 학적으로 대조구와 유사하다.
미토콘드리아 (그림 2c 및 2d)
미토콘드리아 균에 관련된 손상.

토론

불임 부부 수의 증가
지난 수십 년 동안
원인의 증가에 대한 특별한 언급
남성 요인에. 최근 자료에 따르면
산화 스트레스는 불임의 근본적인 역할을한다.
개발 33-35. 정자는 특히
급진주의 자들의 행동에 민감하다.
그들의 혈장 막의 조성,
고도 불포화 지방산이 풍부하고
항산화 효소의 손실 때문에
그들은 성숙 과정에서 세포질을 잃는다. 이것은 왜 의료 및
과학적 관심이 검색을 촉구했다.
기대를 향상시킬 수있는 새로운 물질
남성 불임 분야에서.

재생산시 ROS 농도가 높습니다.
장치 및 정액 유체와 관련된
중요한 기능 장애 및 세포 손상
spermatozoa9,37 포함. 최근의 과학적 증거 24,38-
40은 항산화 제,
전신 경로와 보충 교재로
시험관 기술에서
정액의 준비가 효과적 인 것으로 보인다.
과도하게 상당한 감소를 유도하기 위해
ROS의 높은 레벨. 이것은 유망한 표현이다.
남성 불임에 대한 치료 전략.
현재의 초 구조적 형태학 연구는
이노시톨이 항산화 작용을하며,
미토콘드리아를 우선적으로 겨냥 할 수 있습니다.
변화된 intramitochondrial metabolism과
높은 자유 철 농도와 결함
미토콘드리아 호흡 사슬
자유 라디칼의 생산 증가 및 후속
산화 적 손상은
활력을 손상시킬 수있는 메커니즘
세포, 정자를 포함한다. 특히 후자
세포질이없는 세포는 더 많은 고통을 겪는다.
고농축으로 인한 피해
내부에서 생성 된 ROS의
이 예비 데이터는
이노시톨은 항산화 작용으로 인해,
우선적으로 미토콘드리아를 겨냥 할 수 있습니다.
여러 연구 41-43이 사람과
그들은 변화된
미토콘드리아 기능 (산화 손상)과
운동성 감소 및 비옥 화 능력 감소.
우리의 미래 연구는 이노시톨
행동의 메커니즘,
구조 분석 결과 데이터 (질적
결과)를 양적 민감성
시험 (유동 세포 계측법), 더 나은 목적을 위해
ROS 값들 사이의 조합을 정의
샘플, in vitro에서 시험관 내 처리 및
과증식 성 고환균.

그림 2. 전송 전자 현미경. A-B, 대조 정자 (A)의 극박 부분과 병리학 적 정자
(비). 한계 화 된 염색질 (Cm)과 현저하게 변한 선조체 (Aa)는 (B)에서 볼 수 있습니다. 화살표 헤드가 변경됨을 지적합니다.
미토콘드리아 cristae. C-D, 2 시간 동안 이노시톨 처리 된 병리학 적 정자의 극소 부분. 디,
중간의 배율 : 일부 미토콘드리아는 부분적으로 복원 된 원형 형태로 볼 수 있습니다.


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